Di pêvajoya pêkanîna lêkolînên genetîkî de, em bi gelemperî bi nimûneyên RNA yên têrker re rû bi rû dimînin, mînakî, ji bo lêkolîna tîmorên devkî yên anatomîkî yên piçûk, tewra nimûneyên yek-hucreyî, û nimûneyên mutasyonên genê yên taybetî yên ku di şaneyên mirovan de di astên pir nizm de têne veguheztin.Bê guman, ji bo testa COVID-19, heke di dema nimûneyê de şûşe ne li cîhê rast bin an jî têr nebin, mezinahiya nimûneyê dê pir hindik be, ji ber vê yekê Komîsyona Tenduristî û Plansaziya Malbatê du roj berê derket holê û testê derbas kir, û heke nimûneya asîda nukleîk şeş nimûne negirtibe, hûn dikarin wê rapor bikin.
Hesasiya reagentê girîng e ji ber ku me ev pirsgirêk an ew pirsgirêk heye, ji ber vê yekê em dikarin çi bikin ku hesasiyeta RT-PCR çêtir bikin?
Berî ku em li ser çareseriyên muhtemel nîqaş bikin, em behsa du tevliheviyên mezin ên bi rewşa ku me behs kir re bikin.
Berî her tiştî, em ji windabûna RNA ditirsin dema ku di nimûneya me de tenê çend nifûsa hucreyê hene.Ger rêbazên veqetandin û paqijkirinê yên kevneşopî werin bikar anîn, wekî rêbaza stûnê an rêbaza barîna asîda nukleîk, îhtîmalek mezin heye ku çend nimûne winda bibin.Yek çareserî ev e ku em molekulek hilgirê, wek tRNA, lê zêde bikin, lê tewra wê hingê jî, garantiyek tune ku ceribandina meya vegerandinê baş e.
Ji ber vê yekê rêyek çêtir çi ye?Vebijarkek baş ji bo hucreyên çandî an nimûneyên mîkroanatomîkî ev e ku meriv lîza rasterast bikar bîne.
Fikir ev e ku meriv şaneyan 5 hûrdeman parçe bike, ARNyê berde nav çareseriyê, dûv re reaksiyonê 2 hûrdeman rawestîne, dûv re lîzatê rasterast li reaksiyona veguheztina berevajî were zêdekirin da ku RNA winda nebe, û di dawiyê de cDNA-ya encam rasterast were danîn. nav reaksiyona rast-ê de.
Lê çi dibe bila bibe, ji ber xalek destpêkek tixûbdar an hejmarek piçûk a derbirîna genê armanc, em dikarin hemî RNA-yê ji nû ve vegerînin û hîn jî têra şablonan peyda nekin da ku îşaretek rast-demê baş bistînin?
Di vê rewşê de, pêngava pêş-pêşkêşkirinê dikare pir bikêr be.
Ya jêrîn nexşeyek e ku hestiyariyê piştî veguheztina berevajî zêde bike.Berî ku dest pê bikin, pêdivî ye ku em li jêr bipirsin ka kîjan mebestên me eleqedar in, da ku ji bo van armancan ji bo pêş-zêdekirina primerên taybetî dîzayn bikin.
Ev dikare bi afirandina primera tevlihev a bi 100 cot primers û çerxa reaksiyonê ya 10 û 14 carî were bidestxistin.Ji ber vê yekê, Master Mix-ê ku bi taybetî ji bo vê hewcedariyê hatî çêkirin hewce ye ku ji bo cDNA-ya ku hatî wergirtin pêş-zêde bike.
Sedema danîna hejmara çerxên di navbera 10 û 14 de ev e ku ev hejmara tixûbdar a çerxerê bêserûberiya di navbera armancên cihêreng de misoger dike, ku ev yek ji bo lêkolînerên ku hewceyê agahdariya molekularî ya mîqdar girîng e.
Piştî pêş-amplîfasyonê, em dikarin hejmareke mezin a cDNA bistînin, da ku hesasiya vedîtinê li paş-paşê pir çêtir bibe, û em tewra dikarin nimûneyê hûr bikin û gelek reaksiyonên PCR-ê yên rast-demê pêk bînin da ku xeletiyên rasthatî yên gengaz ji holê rakin.
Dema şandinê: Avrêl-11-2023